PrimeScript™ Reverse Transcriptase

Product Number : 2680


PrimeScript™ Reverse Transcriptase

본 제품은 M-MLV(Moloney Murine Leukemia Virus) 유래의 Reverse Transcriptase를 기반으로 하여 다카라가 독자적으로 개발한 신규 역전사 효소이다. 본 제품은 신장성이 매우 뛰어나 긴 cDNA를 합성할 수 있다. 또, GC rich 등과 같이 cDNA 합성이 어려운 RNA에 대해서도 RNA가 분해될 우려가 있는 고온에서의 반응은 필요로 하지 않으며, 표준 역전사 반응 온도(42℃)에서 효율적으로 cDNA를 합성할 수 있다.


본 효소는 긴 cDNA의 조제나 full length cDNA의 비율이 높은 library 제작에 최적이다.

농도 200 U/㎕

형상


20 mM
Tris-HCl (pH7.8)
100 mM
NaCl
1 mM
EDTA
1 mM
DTT
50%
Glycerol(v/v)

5× PrimeScript Buffer (cDNA 합성용)


250 mM
Tris-HCl (pH8.3)
375 mM
KCl
15 mM
MgCl2

보존 -20℃

PrimeScrip RTase 이용 42℃ 반응온도로, 백그라운드가 낮은 고품질의 cDNA 합성 가능


RNA Ladder (1~12kb)를 주형으로, PrimeScript 및 타사 RTase를 이용하여 역전사 반응.  

활성의 정의


Poly(rA)- oligo(dT)12-18 를 주형/프라이머로 하여 37℃, 10분간 1 nmol의 [3H]dTTP를 합성기질로 사용하는 것을 효소 활성 1U으로 한다.

활성측정용 반응액 조성


50 mM
Tris-HCl (pH8.3)
75 mM
KCl
8 mM
MgCl2
10 mM
DTT
20 ug/ml
(rA)n - (dT)12-18
0.5 mM
[3H]dTTP
0.1%
NP-40

1st-strand cDNA 합성시험


표준 실험법(프로토콜)에 따라 랫트 뇌 유래의 Total RNA 100 ng을 주형으로 하여 Oligo dT 프라이머 50 pmol 및 본 효소 200 units을 이용하여 42℃에서 60분간 1st-strand cDNA 합성 반응을 한다. 이 cDNA 반응액을 주형으로 PCR 하여 아가로즈 겔에 전기 영동한 결과 12 kb의 size 위치에서 명확한 밴드를 확인하였다.

순도


  1. 200 U의 본 효소와 1㎍의 λDNA-Hind III 분해물을 37℃, 1시간 반응시켜도 DNA 전기 영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
  2. 200 U의 본 효소와 1㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 1시간 반응시켜도 DNA 전기 영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
  3. 200 U의 본 효소와 1㎍의 23S 및 16S rRNA 혼합물을 37℃, 1시간 반응시켜도 RNA 전기 영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.

용도


  • 1st-strand cDNA 합성
  • cDNA probe 조제
  • RT- PCR

정확도가 매우 높은 역전사효소




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