PrimeScript™ Reverse Transcriptase
Product Number : 2680
PrimeScript™ Reverse Transcriptase
본 제품은 M-MLV(Moloney Murine Leukemia Virus) 유래의 Reverse Transcriptase를 기반으로 하여 다카라가 독자적으로 개발한 신규 역전사 효소이다. 본 제품은 신장성이 매우 뛰어나 긴 cDNA를 합성할 수 있다. 또, GC rich 등과 같이 cDNA 합성이 어려운 RNA에 대해서도 RNA가 분해될 우려가 있는 고온에서의 반응은 필요로 하지 않으며, 표준 역전사 반응 온도(42℃)에서 효율적으로 cDNA를 합성할 수 있다.
본 효소는 긴 cDNA의 조제나 full length cDNA의 비율이 높은 library 제작에 최적이다.
농도 200 U/㎕
형상
| 20 mM | Tris-HCl (pH7.8) |
| 100 mM | NaCl |
| 1 mM | EDTA |
| 1 mM | DTT |
| 50% | Glycerol(v/v) |
5× PrimeScript Buffer (cDNA 합성용)
| 250 mM | Tris-HCl (pH8.3) |
| 375 mM | KCl |
| 15 mM | MgCl2 |
보존 -20℃
PrimeScrip RTase 이용 42℃ 반응온도로, 백그라운드가 낮은 고품질의 cDNA 합성 가능
RNA Ladder (1~12kb)를 주형으로, PrimeScript 및 타사 RTase를 이용하여 역전사 반응.
활성의 정의
Poly(rA)- oligo(dT)12-18 를 주형/프라이머로 하여 37℃, 10분간 1 nmol의 [3H]dTTP를 합성기질로 사용하는 것을 효소 활성 1U으로 한다.
활성측정용 반응액 조성
| 50 mM | Tris-HCl (pH8.3) |
| 75 mM | KCl |
| 8 mM | MgCl2 |
| 10 mM | DTT |
| 20 ug/ml | (rA)n - (dT)12-18 |
| 0.5 mM | [3H]dTTP |
| 0.1% | NP-40 |
1st-strand cDNA 합성시험
표준 실험법(프로토콜)에 따라 랫트 뇌 유래의 Total RNA 100 ng을 주형으로 하여 Oligo dT 프라이머 50 pmol 및 본 효소 200 units을 이용하여 42℃에서 60분간 1st-strand cDNA 합성 반응을 한다. 이 cDNA 반응액을 주형으로 PCR 하여 아가로즈 겔에 전기 영동한 결과 12 kb의 size 위치에서 명확한 밴드를 확인하였다.
순도
용도
정확도가 매우 높은 역전사효소
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