Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System

Product Number : 6141


Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System

Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141)은 Cap 구조와 Poly(A) 서열을 가진 mRNA를 간편하게 고효율로 합성할 수 있는 키트로, 아래의 두 제품으로 구성되어 있다.


  1. Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)
    - in vitro transcription (IVT)에 사용되는 plasmid template을 간편하게 제작
  2. Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)
    - 최적화된 in vitro transcription (IVT) 시스템으로 고품질의 Capping 된 mRNA를 고수율로 합성


※이 제품에는 Cap analog가 포함되어 있지 않습니다.


본 제품은 CleanCap® Reagent AG (TriLink BioTechnologies)에 최적화되어 있으며, CleanCap® Reagent AG는 별도로 준비 바랍니다.



그림 1. Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141) workflow


  1. Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)
    mRNA의 IVT용 template을 cloning하기 위한 선형화된 plasmid와 편리한 cloning을 위한 In-Fusion® 시약 및 control fragment (FLuc)가 포함되어 있다. 선형화된 plasmid에는 T7 promoter, transcription start sequence (AGG), 5’-UTR (untranslated region), 3’-UTR, Poly(A) 서열 (105 염기)이 포함되어 있다. 여기에 발현하고자 하는 유전자 (coding sequence: CDS)를 cloning하여 mRNA 합성용 plasmid template을 제작할 수 있고, 합성된 mRNA는 인간이나 쥐와 같은 포유류 세포에 적용 가능하다
    * Linearized Template Vector의 서열 정보는 링크를 참고해 주세요.

  2. Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)
    T7 promoter 서열을 포함한 dsDNA를 template으로 IVT 반응을 통해 mRNA를 합성하기 위한 제품이다. 본 제품은 IVT 반응 후 template DNA를 제거하기 위한 DNase I과 합성된 mRNA를 정제하기 위한 LiCl 용액을 포함하고 있다. 진핵생물에서 mRNA를 protein으로 translation 하기 위해서는 5’ 말단에 Cap 구조를 필요로 한다. 본 키트는 CleanCap® Reagent AG (TriLink BioTechnologies)를 이용한 Cap 구조를 가진 mRNA합성에 최적화 되어 있다. 또한 세포 도입 시 면역원성을 최소화하기 위해 UTP 대신 pseudo UTP를 사용하는 경우에도 mRNA의 수율 감소 없이 IVT를 진행할 수 있다.

    본 제품을 사용하면 1회 반응 당 (20 ㎕) 최대 200 ㎍ 이상의 RNA 합성이 가능하다. 또한 필요 시 scale up이 가능하며, 200 ㎕ 반응에서도 mRNA 수율의 직선성 (수율 기대치)에 문제가 없음을 확인했다 (사용자 메뉴얼 참고).

    Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141)을 사용해 mRNA를 합성하는 경우 목적 유전자 (GOI) cloning 후 Poly(A) 서열 하류에 추가 서열 없이 제한효소로 절단하는 것이 중요하다. 따라서 mRNA 합성용 plasmid의 선형화에는 Hind III (Code 1060A)의 사용을 강력히 권장한다 (사용자 메뉴얼 참고).

용도


  • IVT 용 template plamsid DNA 제작
  • CleanCap® Reagent AG (TriLink BioTechnologies)를 사용한 IVT
  • Anti-Reverse Cap Analog (ARCA) 등의 Cap analog를 이용한 capped mRNA 합성
    (※ARCA 사용 시 본 제품과 다른 template 서열이 필요하니 주의 바랍니다.)
  • Long non-coding RNA 합성
  • guide RNA 합성
  • siRNA precursor 합성
  • RT-qPCR용 RNA standard template 합성
  • Hybridization을 위한 RNA probe 합성

내용


Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)

Linearized Template Vector (50 ng/㎕)
10 ㎕
FLuc Control Fragment (100 ng/㎕)*1
10 ㎕
5× In-Fusion Snap Assembly Master Mix
20 ㎕


*1 FLuc Control Fragment의 서열 정보는 아래를 참고.


Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)

10× Transcription Buffer
40 ㎕
10× ATP
40 ㎕
10× CTP
40 ㎕
10× GTP
40 ㎕
10× UTP
40 ㎕
10× Enzyme Mix
40 ㎕
Nuclease-Free Water
3 x 1 ㎖
DNase I
80 ㎕
Lithium Chloride Precipitation Solution
600 ㎕
Positive Control Template (FLuc) (0.5 ㎍/㎕) *2
10 ㎕


*2 T7 promoter, 5’-UTR, FLuc CDS, 3’-UTR, Poly(A) 로 구성, 상세한 서열 정보는 아래를 참고. 



내용


  • Template DNA나 반응에 사용되는 tube, micro-pipette 등이 RNase에 오염되어 있는 경우 RNA의 수율이 저하되거나 fragmentation이 일어날 수 있습니다. 따라서 RNase free의 전용 tube 및 micro-pipette을 사용하고 일회용 장갑을 사용하여 RNase 오염을 주의 바랍니다.
  • 10x Enzyme Mix는 과도한 vortexing을 피하시기 바랍니다.
  • Lithium Chloride Precipitation Solution은 사용 전에 실온에서 융해 바랍니다. 융해 후 혼합한 이후에도 침전물이 남을 경우 37℃에서 용해시키고, 그래도 침전물이 남는 경우에는 그대로 사용해도 됩니다.

보존 -20℃


본 제품 이외에 필요 시약 (주요 시약)


  • CleanCap® Reagent AG (TriLink Biotechnology)
  • pseudo-UTP 등의 변형 nucleotide
  • 제한효소 (Hind III)

서열 정보



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