Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System

Product Number : 6141

그림 1. Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141) workflow

1. Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)
   mRNA의 IVT용 template을 cloning하기 위한 선형화된 plasmid와 편리한 cloning을 위한 In-Fusion® 시약 및 control fragment (FLuc)가 포함되어 있다. 선형화된 plasmid에는 T7 promoter, transcription start sequence (AGG), 5’-UTR (untranslated region), 3’-UTR, Poly(A) 서열 (105 염기)이 포함되어 있다. 여기에 발현하고자 하는 유전자 (coding sequence: CDS)를 cloning하여 mRNA 합성용 plasmid template을 제작할 수 있고, 합성된 mRNA는 인간이나 쥐와 같은 포유류 세포에 적용 가능하다
   * Linearized Template Vector의 서열 정보는 링크를 참고해 주세요.
   
   
2. Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)
   T7 promoter 서열을 포함한 dsDNA를 template으로 IVT 반응을 통해 mRNA를 합성하기 위한 제품이다. 본 제품은 IVT 반응 후 template DNA를 제거하기 위한 DNase I과 합성된 mRNA를 정제하기 위한 LiCl 용액을 포함하고 있다. 진핵생물에서 mRNA를 protein으로 translation 하기 위해서는 5’ 말단에 Cap 구조를 필요로 한다. 본 키트는 CleanCap® Reagent AG (TriLink BioTechnologies)를 이용한 Cap 구조를 가진 mRNA합성에 최적화 되어 있다. 또한 세포 도입 시 면역원성을 최소화하기 위해 UTP 대신 pseudo UTP를 사용하는 경우에도 mRNA의 수율 감소 없이 IVT를 진행할 수 있다.
   
   본 제품을 사용하면 1회 반응 당 (20 ㎕) 최대 200 ㎍ 이상의 RNA 합성이 가능하다. 또한 필요 시 scale up이 가능하며, 200 ㎕ 반응에서도 mRNA 수율의 직선성 (수율 기대치)에 문제가 없음을 확인했다 (사용자 메뉴얼 참고).
   
   Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System (Code 6141)을 사용해 mRNA를 합성하는 경우 목적 유전자 (GOI) cloning 후 Poly(A) 서열 하류에 추가 서열 없이 제한효소로 절단하는 것이 중요하다. 따라서 mRNA 합성용 plasmid의 선형화에는 Hind III (Code 1060A)의 사용을 강력히 권장한다 (사용자 메뉴얼 참고).

용도

• IVT 용 template plamsid DNA 제작
• CleanCap® Reagent AG (TriLink BioTechnologies)를 사용한 IVT
• Anti-Reverse Cap Analog (ARCA) 등의 Cap analog를 이용한 capped mRNA 합성
  (※ARCA 사용 시 본 제품과 다른 template 서열이 필요하니 주의 바랍니다.)
• Long non-coding RNA 합성
• guide RNA 합성
• siRNA precursor 합성
• RT-qPCR용 RNA standard template 합성
• Hybridization을 위한 RNA probe 합성

내용

Cloning Kit for mRNA Template (Code 6143)

*1 FLuc Control Fragment의 서열 정보는 아래를 참고.

Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)

*2 T7 promoter, 5’-UTR, FLuc CDS, 3’-UTR, Poly(A) 로 구성, 상세한 서열 정보는 아래를 참고. 

내용

• Template DNA나 반응에 사용되는 tube, micro-pipette 등이 RNase에 오염되어 있는 경우 RNA의 수율이 저하되거나 fragmentation이 일어날 수 있습니다. 따라서 RNase free의 전용 tube 및 micro-pipette을 사용하고 일회용 장갑을 사용하여 RNase 오염을 주의 바랍니다.
• 10x Enzyme Mix는 과도한 vortexing을 피하시기 바랍니다.
• Lithium Chloride Precipitation Solution은 사용 전에 실온에서 융해 바랍니다. 융해 후 혼합한 이후에도 침전물이 남을 경우 37℃에서 용해시키고, 그래도 침전물이 남는 경우에는 그대로 사용해도 됩니다.

보존 -20℃

본 제품 이외에 필요 시약 (주요 시약)

• CleanCap® Reagent AG (TriLink Biotechnology)
• pseudo-UTP 등의 변형 nucleotide
• 제한효소 (Hind III)

서열 정보

• FLuc Control Fragment
  - sequence fasta 파일 바로가기
  - Positive Control Template (FLuc)의 2,685~4,367 (1,683 bp)과 동일한 서열이다.
  
  
• Linearized Template Vector
  - sequence fasta 파일 바로가기
  - Vector map 바로가기
  
  
• Positive Control Template(FLuc)
  - sequence fasta 파일 바로가기
  - Vector map 바로가기