Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep kit

Product Number : 635710


Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep kit

Capturem™ His-tagged Purifcation 시리즈는 차세대 멤브레인 기술을 적용하여 His-tagged protein을 정제할 수 있는 혁신적인 제품으로써, High-capacity Ni-NTA Capturem™ membranes이 차용되어있다.


기존의 metal affinity resin에 비하여 보다 다양한 샘플 (박테리아, 포유류 적용 가능)과 다양한 조건 (비변성 또는 변성 조건 (8M urea, 6M Guanidine-HCl)에서도 적용이 가능하다.


Capturem™ 시리즈는 레진을 이용한 정제와는 달리 빠른 시간 내에 실온에서 조작하기 때문에 단백질의 분해(degradation), 응집 (aggregation), 실활 (loss of activity) 등의 단백질 열변성, 불활성화에 대한 위험을 감소시킬 수 있다. 또한 Bed volume이 작고 (2ul: Miniprep), Binding capacity가 높아 ( 75 mg/cm3), 고순도, 고농도의 단백질을 정제할 수 있다.


Spin column타입으로 빠르고 간편한 His-tag 단백질 정제


Capturem™ His-tagged Purifcation 시리즈는 아래와 같이 Miniprep, Maxiprep, 24well plate, 96well plate, Large volume으로 제공된다 (표 1).

표 1. Capturem™ His-tagged protein purification kit 시리즈 비교 

* Maxiprep Kit에는 50㎖ tube용, 24well plate, 96well plate에는 각각 24well plate, 96well plate용 centrifuge가 필요합니다.
** Large volume의 경우, Vacuum source (e.g. vacuum pump equipped with a trap and a vacuum controller, or a peristaltic pump)가 필요하다.
*** 정제수율은 사용하고자 하시는 Sample type, species, antibody isotype에 따라 달라질 수 있습니다.




그림 1. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Workflow
xTractor Buffer를 Capturem™ 컬럼에 첨가하여 Equilibration을 진행 후, His-tagged protein을 첨가하고 결합시킨다. 뒤이어 Washing Buffer를 이용하여 세척 및 원심분리 후 Elution Buffer를 이용하여 용출한다. Miniprep과 96well plate 타입의 경우는 Elution buffer 100ul를, Maxiprep의 경우는 Elution buffer 500ul를 사용하여 90%이상 Elution 가능하다.


표 2. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Buffer의 조성


Buffer
조성
Lysis Buffer
xTractor Buffer (Code 635625) 사용 권장. Standard lysis buffer도 사용 가능.
Wash Buffer
150 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, pH 7.6
Elution Buffer
500 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, 500 mM imidazole, pH7.6




그림 2. Capturem™ His-tagged Purification 제품의 Membrane technology
장시간을 필요로 하는 레진 정제에 비해, Capturem™ membrane은 표면적과 용량 (Capacity)가 크기 때문에 빠른 시간 내에 막 통과가 가능하므로 단백질 변성이 없는 단백질을 정제 가능하다. 또한 낮은 압력으로 용액이 통과할 수 있으므로 단백질의 품질 저하를 방지하며, Bed volume이 작아 고순도로 정제할 수 있다.


표 3. Reagents Compatible with His-Tagged Purification Miniprep Kits


ReagentCompatibility
MOPS200 mM
HEPES200 mM
Tris200 mM
EDTA10 mM
Beta-mercaptoethanol30 mM
DTT10 mM
TCEP5 mM
Guanidine-HCl6 M
Urea8 M
Nonionic    detergent (Triton X-100)2%
Nonionic    detergent (Tween 20)2%
Anionic detergent    (SDS)1%
Arginine500 mM
Glycine100 mM
Histidine20 mM
Sodium chloride2 M
Imidazole40 mM
Glycerol10%




그림 4. Capturem™ His-tagged Purification Large Volume
(왼쪽) Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units

(오른쪽) Bottle Thread Adaptor


 

그림 5. Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit 적용사진
(A) 33mm 지름의 입구를 가진 bottle에 설치한 Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit
(B) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate를 Capturem unit에 로딩한 사진
(C, 위) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate 로딩 후, washing을 한 membrane의 모습. 황록색을 띄고 있다.
(C, 아래) Elution 진행 후의 membrane의 색. 원래의 membrane 색인 흰색을 띄고 있다.
(D) 50㎖ tube에 elution을 완료한 6x His-GFPuv 단백질 용액


적용


  • Biochemical/enzymatic assays
  • Pull-down or other protein interaction assays
  • Confirmation screening
  • Protein/ligand affinity analysis
  • Crystallography or other structural analyses
  • Antibody production
  • Toxicology studies
  • Protein transfer to live cells

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