표 1. Capturem™ His-tagged protein purification kit 시리즈 비교
* Maxiprep Kit에는 50㎖ tube용, 24well plate, 96well plate에는 각각 24well plate, 96well plate용 centrifuge가 필요합니다.
** Large volume의 경우, Vacuum source (e.g. vacuum pump equipped with a trap and a vacuum controller, or a peristaltic pump)가 필요하다.
*** 정제수율은 사용하고자 하시는 Sample type, species, antibody isotype에 따라 달라질 수 있습니다.
그림 1. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Workflow
xTractor Buffer를 Capturem™ 컬럼에 첨가하여 Equilibration을 진행 후, His-tagged protein을 첨가하고 결합시킨다. 뒤이어 Washing Buffer를 이용하여 세척 및 원심분리 후 Elution Buffer를 이용하여 용출한다. Miniprep과 96well plate 타입의 경우는 Elution buffer 100ul를, Maxiprep의 경우는 Elution buffer 500ul를 사용하여 90%이상 Elution 가능하다.
표 2. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Buffer의 조성
| Buffer | 조성 |
| Lysis Buffer | xTractor Buffer (Code 635625) 사용 권장. Standard lysis buffer도 사용 가능. |
| Wash Buffer | 150 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, pH 7.6 |
| Elution Buffer | 500 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, 500 mM imidazole, pH7.6 |
그림 2. Capturem™ His-tagged Purification 제품의 Membrane technology
장시간을 필요로 하는 레진 정제에 비해, Capturem™ membrane은 표면적과 용량 (Capacity)가 크기 때문에 빠른 시간 내에 막 통과가 가능하므로 단백질 변성이 없는 단백질을 정제 가능하다. 또한 낮은 압력으로 용액이 통과할 수 있으므로 단백질의 품질 저하를 방지하며, Bed volume이 작아 고순도로 정제할 수 있다.
표 3. Reagents Compatible with His-Tagged Purification Miniprep Kits
| Reagent | Compatibility |
| MOPS | 200 mM |
| HEPES | 200 mM |
| Tris | 200 mM |
| EDTA | 10 mM |
| Beta-mercaptoethanol | 30 mM |
| DTT | 10 mM |
| TCEP | 5 mM |
| Guanidine-HCl | 6 M |
| Urea | 8 M |
| Nonionic detergent (Triton X-100) | 2% |
| Nonionic detergent (Tween 20) | 2% |
| Anionic detergent (SDS) | 1% |
| Arginine | 500 mM |
| Glycine | 100 mM |
| Histidine | 20 mM |
| Sodium chloride | 2 M |
| Imidazole | 40 mM |
| Glycerol | 10% |
그림 4. Capturem™ His-tagged Purification Large Volume
(왼쪽) Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units
(오른쪽) Bottle Thread Adaptor
그림 5. Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit 적용사진
(A) 33mm 지름의 입구를 가진 bottle에 설치한 Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit
(B) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate를 Capturem unit에 로딩한 사진
(C, 위) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate 로딩 후, washing을 한 membrane의 모습. 황록색을 띄고 있다.
(C, 아래) Elution 진행 후의 membrane의 색. 원래의 membrane 색인 흰색을 띄고 있다.
(D) 50㎖ tube에 elution을 완료한 6x His-GFPuv 단백질 용액
