Thermo Scientific™ NE-PER™ Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents

Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit는 효율적으로 세포를 용해하고, 별도의 세포질 및 핵 단백질 분획을 2시간 이내에 추출해 줍니다.

NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit의 특징:

• 신속성 : 수용성 단백질의 핵 및 세포질 분획을 2시간 이내에 채취
• 입증된 제품 : NE-PER Reagent Kit는 저명한 논문 950편 이상에 인용됨
• 활용성 : 배양된 세포나 조직의 핵 단백질(신선한 샘플만을 제공하기 위한 방법)
• 확장성 : 세포와 조직에서 추출물을 생성할 수 있는 두 가지 키트 크기
• 편의성 : 지침이 간단하여 여러 기울기(gradient)에서 초고속 원심분리(ultracentrifugation)가 필요하지 않음
• 호환성 : 웨스턴 블로팅(Western blotting), 겔 전이 분석, 단백질 분석, 리포터 유전자 분석, 효소 활성 분석을 포함한 후속 분석에서 사용 가능

NE-PER Kit는 간단한 단계식 세포 용해와 핵 및 세포질 단백질 분획의 원심 분리를 포함하는 핵 단백질 추출 방법입니다. 벤치톱 미세원심분리, 튜브, 피펫만이 필요합니다. NE-PER Reagent는 게놈 DNA와 mRNA의 간섭과 교차 오염을 최소화하면서 세포질 단백질과 핵 단백질을 분획으로 효율적으로 용해하고 분리합니다. 탈염 또는 희석 과정을 거친 분리된 단백질을 사용해 EMSA(electrophoretic mobility shift assay), Co-IP(co-immunoprecipitation), 풀다운(pull-down) 분석과 같은 단백질 상호작용 실험을 실시할 수 있습니다.

핵을 분리하고 핵 단백질 추출물을 준비하는 데 다양한 방법을 사용할 수 있습니다. 핵 추출물을 준비하는 대다수 방법은 기계식 균질화, 반복적인 동결/해동, 핵 단백질의 무결성을 손상시킬 수도 있는 광범위한 원심분리 또는 투석 단계가 필요한 기나긴 과정입니다. NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagent Kit는 단계식 세포 용해, 무손상 핵에서 세포질 분리를 거쳐 게놈 DNA와 mRNA에서 핵 단백질 추출에 이르는 작업을 지원하는 시약 기반 프로토콜입니다. 이 온화한 공정에는 2시간 미만이 소요되고 배양한 세포를 사용할 때 표준 벤치톱 원심분리기만이 필요합니다. 또한, 활성 핵 단백질과 세포질 단백질을 동일한 세포 배양이나 조직 샘플에서 회수할 수 있습니다.

이 키트는 세포 200만개에서 보통 200-500µg의 세포질 단백질과 100-200µg의 핵 단백질(농도 1mg/mL)을 생성합니다. 세포질 분획과 핵 분획 간의 일반적인 교차 오염은 약 10%입니다. 이 방법은 주로 핵에서 수용성 단백질을 회수하고, 크로마틴에 결합된 단백질이나 핵막의 내재성 막 단백질은 그렇게 많이 회수하지 않습니다. 핵 추출물의 단백질 농도는 추출 효율성을 크게 손실하지 않고도 추출 시 사용되는 NER(nuclear extraction reagent) 용적을 변화하여 쉽게 조작할 수 있습니다. 세포에서 핵 단백질을 특이적으로 추출하는 작업이 많은 유전자 조절 연구에서 성공 여부를 판가름하는 데 필수적입니다. 핵을 분리하고 핵 단백질 추출물을 준비하기 위한 다양한 방법이 있지만, 이 방법 중 대다수는 기계식 균질화, 반복적인 동결/해동, 핵 단백질의 무결성을 손상시킬 수도 있는 광범위한 원심분리 또는 투석 단계가 필요한 기나긴 과정입니다. NE-PER Kit는 이러한 문제를 말끔히 해결하여 EMSA와 다른 여러 분석 기법에서 사용할 수 있는 고품질 농도의 핵 단백질 추출물을 채취합니다.