One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG

Product Number : RR601


One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG

본 제품은 Dual Labeled Probe법의 1 step Real Time RT-PCR 전용 premix 시약이다.

본 제품은 qPCR을 수행하기 위한 역전사효소와 PCR 효소 및 반응 buffer가 premix화 되어 있어 하나의 튜브 내에서 한번에 RT-PCR 반응을 진행할 수 있어, 조작이 간편하고 contamination의 위험을 낮출 수 있다.


역전사 효소는 내열성이 높고, 반응 억제물질이 존재하여도 효율적으로 cDNA 합성이 가능한 PrimeScript RTase III 를 사용하고 있다.


또한 본 제품은 복수의 반응을 동시에 실시하는 multiplex Real Time RT-PCR 반응에도 적용할 수 있다.

반복적인 PCR 반응에서 발생 위험이 높은 carryover contamination을 방지하기 위해 UNG를 포함한 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG (Code RR601S/A/B)도 판매하고 있다. 본 제품을 이용하면 RNA/DNA virus의 조기 검출이나 mRNA 발현해석을 좀더 간편하고 정확하게 진행할 수 있다.


본 제품은 Thermal Cycler Dice® Real Time System 장치에 최적화되어 있지만, 주요 Real Time PCR 장치에도 사용할 수 있음을 확인하였다.

  • Thermal Cycler Dice Real Time System III 시리즈 (Code TP950 외)
  • Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)
  • LightCycler 96 System (Roche Diagnostics)
  • CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad) 등


주의: Intercalater (TB Green™)법을 이용한 1 step Real Time RT-PCR에는 아래의 제품을 추천합니다.


내용


One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (Code RR600A, 200회; 25㎕ 반응 시)

One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (2×)625    ㎕ × 4
RNase    Free Water1.25    ㎖ × 2
ROX Reference Dye (50×conc.)*100    ㎕
ROX Reference Dye II (50×conc.)*100    ㎕


One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG (Code RR601A, 200회; 25㎕ 반응 시) 

One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG (2×)625    ㎕ × 4
RNase    Free Water1.25    ㎖ × 2
ROX Reference Dye (50×conc.)*100    ㎕
ROX Reference Dye II (50×conc.)*100    ㎕


* Life Technologies의 Real Time PCR 장치와 같이 well 간 형광 신호 보정이 필요한 장치에 사용하며, 자세한 내용은 제품매뉴얼을 참고.


  • ROX Reference Dye를 사용하는 기종
    - ROX Reference Dye (50×)
    Applied Biosystems 7900HT/7300 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)
    StepOnePlus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)
    - ROX Reference Dye II (50×)
       Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)
  • ROX Reference Dye를 사용하지 않는 기종
    - Thermal Cycler Dice Real Time System 시리즈 (Takara)
    - LightCycler/LightCycler 480 system (Roche Diagnostics)
    - CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad)

제품 특징


  • One Step RT-PCR 방법으로 RNA바이러스 등의 해석을 신속 정확하게 할 수 있다.
  • 본 제품은 다양한 반응억제물질에 높은 저항성을 나타내므로, 간이 핵산추출 시약을 이용하여 추출한 crude RNA 샘플에서도 Real Time RT-PCR 분석이 가능하다.
    *다만, 검출 불능일 경우나, 보다 정밀한 안정된 해석 결과를 필요로 하는 경우에는 순도 높은 RNA샘플을 이용한다.
    배양 세포나 조직 샘플의 고순도 total RNA의 조제 시 권장 제품
    - TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit (Code 9767A)
    - RNAiso Plus (Code 9108/9109)



보존 -20℃


반응억제물질에 대한 내성실험 예


[반응저해 물질에 대한 내성 테스트]


그림 1. 반응 억제물질에 대한 내성 시험
다섯 종류의 반응 억제물질을 반응 용액에 첨가하여 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, Takara 기존 제품 및 타사 제품의 저해 물질에 대한 내성을 테스트하였다. One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix는 "첨가 없음"과 Ct값의 차이가 적고 각종 반응 저해물질에 대한 내성이 높은 것으로 나타났다. 


그림 2. Multiplex 분석에서의 재현성
Human HeLa Cell Total RNA 1 pg~100 ng을 주형으로 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix를 이용해 ACTB, GAPDH, PPIA, YWHAZ 유전자의 multiplex 발현 해석을 실시하였다. 모든 타겟에서 R2>0.99를 충족시켰다. 



그림 3. Human ACTB 유전자 발현 해석에서의 재현성 확인

Human HeLa Cell Total RNA (Code 636543) 1 pg ~1 ㎍을 주형으로 One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG를 이용하여 ACTB유전자 발현 해석을 3일간 나누어 진행하였다. 그 결과, One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG은 높은 직선성 (Rsq: 1)을 가지며 안정된 증폭 효율 (Eff.  92.5%)를 나타내었다.


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