강력한 T-cell 반응은 antitumor immunity를 지속하는 데 있어 중요한 요소다. 이와 관련하여 종양의 항원 표적화에 관여하는 TCR의 결합력 (avidity)는 T-cell 반응의 질에 굉장히 중요하게 작용한다.

본 연구에서는 His177과 Asp36 간의 상호작용을 통해, immunoglobulin superfamily member 4 (IGSF4)의 transmembrane (TM) 도메인과 CD3 ζ-chain의 TM이 결합하여 IGSF4-CD3 ζ dimer를 형성함을 보고하였다.

IGSF4는 또한 TM 도메인의 GxxVA 변형을 통해 동종이량체 (homo-dimer)를 형성함으로써, 큰 크기의 TCR cluster를 구성한다. 세포 외 도메인이 결여된 IGSF4 (IG4ΔEXT, deletion mutation of the extracellular domain of IGSF4)의 과발현은 OTI CD8+ T cell이 IFN-γ와 TNF-α를 방출하고, OVA+-B16F10 흑색종 세포를 사멸 시키는 것을 강화한다. 동물 모델에서 IG4ΔEXT는 B16F10 종양의 전이와 성장을 유의하게 감소시킨다. 이를 종합한 결과로, IGS4의 TM 도메인이 TCR 결합력을 조절할 수 있음을 나타내며, TCR 결합력 조절을 통해 cytotoxic T cell의 항 종양 활성을 개선시키는 데 중요한 역할을 함을 확인할 수 있다. 

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Retrovirus의 transduction을 위해 6㎠ 크기의 dish에 1 x 106개의 retroviral packaging cell을 seeding하고 overnight 동안 배양하였다.

해당 세포에 retroviral vector (EV, wt-IG4, IG4ΔEXT)와 packaging vector를 transfection하여 retrovirus particle을 생산하였다. 48시간 이후 회수한 상층액은 20 ㎍/㎖의 RetroNectin® (Code T100A)이 코팅된 12 well plate에서 배양된 1 x 106개의 mouse T cell과 혼합하였고, rIL-2 (100 U/㎖)를 추가하여 22,000 x g, 25 °C의 조건에서 90분간 원심분리 하였다. Transduction된 T cell을 rIL-2를 포함하는 새로운 배지에서 3일간 유지 및 배양하였고, GFP를 발현하는 세포는 감염 후 2일 차에 측정하였다. Retrovirus transduction을 위해, mouse CD8+ T cell은 2 ㎍/㎖의 anti-CD3/28이 코팅된 plate에서 rIL-2 (100 U/㎖)와 함께 48시간 동안 배양하였다. 

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