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RetroNectin - 2

2023-08-08
조회수 93
에스앤씨와 함께하는 생명과학 이야기 뉴스레터

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안녕하세요!
에스앤씨와 함께하는 생명과학 이야기 뉴스레터입니다.
다양한 생명과학 학술정보를 주기적으로 보내드리는 중입니다.

두번째 이야기
RetroNectin - 2

https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.591054

Potentiating the Antitumor Activity of Cytotoxic T Cells via the Transmembrane Domain of IGSF4 That Increases TCR Avidity 

Hye-Ran Kim, Jeong-Su Park, Yasmin Fatima, Maiza Kausar, Jin-Hwa Park, Chang-Duk Jun 


아래 내용은 다카라코리아에서 직접 번역한 내용으로, 해석하는 과정에서 원작자의 의도와 상이한 내용이 포함되어 있을 수 있습니다. 학술 정보를 목적으로 하는 경우 원문을 참고하여 주시기를 바랍니다.


Abstract 미리보기▼

강력한 T-cell 반응은 antitumor immunity를 지속하는 데 있어 중요한 요소다. 이와 관련하여 종양의 항원 표적화에 관여하는 TCR의 결합력 (avidity)는 T-cell 반응의 질에 굉장히 중요하게 작용한다.


본 연구에서는 His177과 Asp36 간의 상호작용을 통해, immunoglobulin superfamily member 4 (IGSF4)의 transmembrane (TM) 도메인과 CD3 ζ-chain의 TM이 결합하여 IGSF4-CD3 ζ dimer를 형성함을 보고하였다.


IGSF4는 또한 TM 도메인의 GxxVA 변형을 통해 동종이량체 (homo-dimer)를 형성함으로써, 큰 크기의 TCR cluster를 구성한다. 세포 외 도메인이 결여된 IGSF4 (IG4ΔEXT, deletion mutation of the extracellular domain of IGSF4)의 과발현은 OTI CD8+ T cell이 IFN-γ와 TNF-α를 방출하고, OVA+-B16F10 흑색종 세포를 사멸 시키는 것을 강화한다. 동물 모델에서 IG4ΔEXT는 B16F10 종양의 전이와 성장을 유의하게 감소시킨다. 이를 종합한 결과로, IGS4의 TM 도메인이 TCR 결합력을 조절할 수 있음을 나타내며, TCR 결합력 조절을 통해 cytotoxic T cell의 항 종양 활성을 개선시키는 데 중요한 역할을 함을 확인할 수 있다. 


ㄴ Takara 제품을 이용한 method 미리보기

Retrovirus의 transduction을 위해 6㎠ 크기의 dish에 1 x 106개의 retroviral packaging cell을 seeding하고 overnight 동안 배양하였다.


해당 세포에 retroviral vector (EV, wt-IG4, IG4ΔEXT)와 packaging vector를 transfection하여 retrovirus particle을 생산하였다. 48시간 이후 회수한 상층액은 20 ㎍/㎖의 RetroNectin® (Code T100A)이 코팅된 12 well plate에서 배양된 1 x 106개의 mouse T cell과 혼합하였고, rIL-2 (100 U/㎖)를 추가하여 22,000 x g, 25 °C의 조건에서 90분간 원심분리 하였다. Transduction된 T cell을 rIL-2를 포함하는 새로운 배지에서 3일간 유지 및 배양하였고, GFP를 발현하는 세포는 감염 후 2일 차에 측정하였다. Retrovirus transduction을 위해, mouse CD8+ T cell은 2 ㎍/㎖의 anti-CD3/28이 코팅된 plate에서 rIL-2 (100 U/㎖)와 함께 48시간 동안 배양하였다. 


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